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体外受精的卵母细胞收集

发布时间:2019-10-24 08:53:10 编辑:笔名

体外受精的卵母细胞收集

1.准备各种液体

(1)洗涤液2个30mm培养皿(Falcon 3001)或4个孔的培养(Nuncon:),加入0.8~2ml 10%血清Eade’s培养液。

(2)受*(insemination medium,IM) 4孔:Nunclon培养皿中每孔加入0.8ml或制成数个10%d的10%血清Earle’s液于(falcon 3002)平皿中微滴,表面用石蜡油覆盖。

(3)生长液(growth medium,GM) 与受*同样配制。各种培养液制备完成后,都应放入5%c02,370C培养箱内平衡,以保证pH及渗透压稳定。

2.收集卵母细胞

(1)用10ml试管(Falcon 2001)收集卵细胞迅速将卵泡液倒入培养皿内(I~alcon3003),置实体解剖镜下(15×),先用肉眼观察可看到一个灰色透亮的粘液团块,被称为卵一冠一丘复合物(OCCC:),再在解剖镜下观察,确认是否有卵母细胞存在。

(2)根据OCCC的形态学如颗粒细胞大小及分散度等判断卵细胞成熟度。

O级:无卵丘结构,可见放射冠或第一极体。

工级:很薄的卵丘和(或)放射冠围绕在透明带周围,见第一极体

Ⅱ级:中等大小的卵丘结构,细胞松散,放射冠界限清晰。

Ⅲ级:卵丘结构大而松散,放射冠薄分界不清。

(3)将收集到的卵一冠一丘复合体OCCC放入洗涤液内,冲洗两次,去除周围的红细胞,并转移至IM液中,置5%C02及370C培养箱内培养4~6小时,使卵母细胞进一步成熟。

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